Jak mohu izolovat bakterie z půdy ?

Půda jebohatým zdrojem mnoha různých druhů bakterií . Bakterie pomoc při kompostování rostlinného a živočišného organického materiálu , při stanovení anorganických prvků a v interakci s kořeny rostlin a půdních částic . I v malém vzorku půdy , jako je ta obsažená v lžíce , existují miliony jednotlivých přítomných bakterií . Úkolem v izolaci jednotlivých bakterií je zředit vzorek půdy , aby se bakteriální koncentrace natolik nízká, žejediná bakterie mohou být odděleny od ostatních a mohou růst do čisté kolonie na živném agaru . Věci, které budete potřebovat
Soy bujón Trypticase
5 ml zkumavky , sterilizované a limitován
Sterilní dřevěné zmrzlinu hole
Wax značení tužka
Stojan na zkumavky
Papírové ručníky
Bleach ( 10 procent roztok)
Bunsen hořák
Zápasy klipart inokulací smyčka
Trypticase sójovém agaru
Petri desek
inkubátoru
Chladnička
Zobrazit další instrukce
Vzorek půdy
1 zkumavky jsou určeny pro ředění vzorků půdy .

zrušilkorkový sterilní zkumavka containg 5 ml živné Trypticase Soy bujón . Vyberte si sterilní zmrzlinu tyč .
2. Použijte sterilní zmrzlinu hůl sbírat půdy .

Jděte ven a sbírat malý vzorek půdy se špičkou Zmrzlinu hole , za použití sterilní techniky , metody pro zajištěnívzorek není kontaminován , auživatel není infikován .
3

zakryli, pak ji do zkumavky a půdu do živného média ve zkumavce . Mix půdu do vývaru s Zmrzlinu holí . Zakryjte zkumavky s víčkem . Napište datum a kolekce kolekce umístění na straně zkumavky pomocí vosku označení tužku .
4

vložte zkumavku do stojanu zkumavky po dobu asi 30 minut, abypůda usadit na dno .
Naočkujte Petri Dish
5

dezinfikujte pracovní plochu čištěním jej 10 procent bělidla řešení a papírové ručníky .
6

Otočte Petriho misku tak, aby spodní víčko obsahující agar je nahoru . Nakreslete T na dolním víčku , s břevnoT oddělí horní třetině víka a na stonku T oddělující spodní dvě třetiny na polovinu .
7 PoužitíBunsen hořák plamene očka .

Zapnutí a světlo Bunsen hořák . Flameočkování smyčku nad plamenem hořáku Bunsenova .
8

zakryli, pak jizkumavky a dotknout smyčku do horní vrstvy jasnější kapaliny . Vytáhněte smyčky a znovu zkumavku .
Metoda T - Streak
9 Zkontrolujte, klikatý pruh přes jednu třetinu misky .

Pomocí příčka T nakreslené na zadní straně spodního víka jako referenční bod . Stiskněte inokulací smyčku na jedné straně prostoru nad T břevno a čerpat špičku po povrchu agaru v klikatá čára , která končí na linii na opačné straně prostoru .
10

Odstraňte inokulací smyčka a zavřete Petriho misku . Plamen smyčku v Bunsenovým hořáku a nechte ho krátce vychladnout . Otevřete Petriho misku a dotknout smyčky jednom místě v blízkosti samého konce řádku již natažený smyčky . Provést jiný cikcak lince v pravých úhlech k první linii , vztahující se na první místo v rámci T břevno a na jedné straně stonku .
11.

Odstraňte smyčku a zavřete Petriho misku . Opět plamen smyčku , otevřete Petriho misku , a dotkněte se mírně chlazené smyčku na druhém řádku u konce. Nakreslete další klikatou čáru kolmo na druhý řádek ve zbývající volné místo na Petriho misce .
12

Zavřete Petriho misku po vytažení smyčky . Plamen smyčku a odložte jej stranou . Vypněte Bunsen hořák .
Střední Kultura
13 Vyberte jednu kolonii dále izolovat bakterie .

Dejte Petriho misky do inkubátoru na 30 stupňů Celsia po dobu 48 hodin . Vezměte ji ven a prozkoumat agar pro růst bakteriálních kolonií . Vyberte si kolonie , která vypadá uniformu a diskrétní v celkovém vzhledu , což je známkou toho, žekolonie vznikly pouze z jedné bakterie . Kruhumístění kolonie na zadní straně spodního víka s označením tužkou .
14

Flameinokulací smyčka . Otevřete Petriho misku a dotknout semírně ochladí smyčku do středu kolonie .
15

Opakujte kroky pro výrobu T - sérii na novou Petriho misky s agarem ve spodní víčko . Je-lipruh vyrobený aPetriho misky se uzavře , zapisovat datum a vzorekpůdyinokulum byla pořízena z na spodní straně spodního víka . Vypněte Bunsen hořák .
16

Inkubujte Petriho misky na 30 stupňů Celsia po dobu 48 hodin . Zkontrolujte kolonie , které rostly na agaru , hledá jednotnosti barvy, tvaru a textury . Opakujte sekundární kultury řízení, pokud existují nějaké kolonie , které se liší výrazně ve vzhledu od ostatních , což znamená, žejediné bakterie nebyl izolován .
17 Stejné vypadající kolonie ukazují bakteriální izolaci .

mrazitagarem , který obsahuje stejné vypadající kolonie na tom , suniformita jedobré znamení, že pouzejediná bakterie byl izolován ze vzorku půdy .
18

Proveďte další testy identifikace izolovaných bakterií v případě potřeby, jako je gram skvrn , mikroskopické vyšetření a kultury na různých druzích agaru .